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發布時間: 2017 - 07 - 18
Drop Maker 樣本制備儀采用光、機、電一體化設計,配套具有自主知識產權的微流控芯片,可以將水相樣本快速制備成納升體積的液滴。液滴數與樣本體積相關,30微升樣本可制備約5萬個液滴。液滴尺寸均一,并可在PCR擴增后保持穩定。產品說明起始樣本量(μL)20-50制備通量1-8個樣本制備時間4min / 8樣本每 30 μL 樣本液滴數約50000個儀器尺寸(寬 ´ 深 ´ 高)38 x 34 x 35 cm
發布時間: 2017 - 07 - 18
Chip Reader 生物芯片閱讀儀采用光、機、電一體化設計,及激光共聚焦原理,配套有自主知識產權的微流控芯片,可以準確快速地定位、識別納升體積微液滴,獲取其熒光信號值。經過泊松統計分析,提供研究者所需的陽性、陰性液滴數絕對數值,從而推算出起始靶標核酸分子的精確濃度。Chip Reader  生物芯片閱讀儀兼容Taqman水解探針和EVAGreen檢測。產品說明閱讀通道FAM(EvaGreen)、VIC(HEX)閱讀通量1-8個樣本閱讀時間20min / 8樣本儀器尺寸(寬 ´ 深 ´ 高)45 x 47 x 49 cm
發布時間: 2017 - 08 - 14
數字PCR耗材分為微液滴樣本制備通用試劑盒(包含微液滴生成芯片、微液滴生成油、微液滴生成芯片密封墊、8聯排管及8聯排管蓋),以及微液滴檢測通用試劑盒(包含微液滴檢測芯片、微液滴檢測油及微液滴檢測芯片密封墊),用于配套Drop Maker 樣本制備儀,將水相溶液樣本制備為納升體積液滴,并通過Chip Reader 生物芯片閱讀儀對微液滴進行定量檢測。產品說明起始樣本量(μL)20-50芯片通量8個樣本池(可單獨使用)
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數字PCR在靶向測序建庫中的應用

日期: 2018-11-23
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7星彩杀号定胆 www.pvyapl.com.cn 數字PCR在靶向測序建庫中的應用

二代測序技術,也稱為高通量測序技術,一次可對幾十萬到幾百萬條DNA分子進行序列測定。靶向捕獲測序技術是二代測序技術衍生出來的一個重要分支,只對感興趣的目標基因進行擴增測序,能夠更高效經濟地測定DNA序列。靶向捕獲建庫是測序流程中的重要環節,目前具有代表性的方法是羅氏Nimblegen序列捕獲芯片、安捷倫Sureselect基于液相靶向捕獲系統和基于多重PCR擴增的基因捕獲系統1。


目前常用的靶向文庫制備方法多樣,但在捕獲均一性、中靶效率、操作流程、檢測成本等方面需要改進?;赑CR擴增引物設計的靈活性及簡單的操作流程,多家公司開發了多重PCR擴增的捕獲體系。多重PCR擴增體系通過多對引物對基因組進行擴增捕獲,但隨著引物增加時,擴增引物之間或引物與微量擴增模板之間的相互作用會降低擴增效率。微液滴數字PCR作為一種新興的檢測技術,通過數以萬計的微液滴將擴增模板分散到不同微液滴中,降低引物對模板的競爭作用,實現對微量模板如循環腫瘤DNA等有效擴增,獲得更高的捕獲效率(如下圖所示)。

數字PCR在靶向測序建庫中的應用

Tewhey2最早將微液滴數字PCR平臺應用于靶向捕獲測序中,該研究先制備包含不同擴增引物和打斷基因組DNA的微液滴庫,然后將兩種不同液滴按照1:1比例融合,PCR擴增后完成捕獲(如下圖所示)。該方法通過微液滴將不同引物進行分隔,避免了引物之間的競爭作用,提高了目標序列捕獲的特異性和均一性。研究結果表明微液滴數字PCR技術適用于高通量測序的文庫構建。

數字PCR在靶向測序建庫中的應用

Taylor3建立了Digital Deletion Detection(3D)檢測方法,通過微液滴數字PCR技術最低可對10-8頻率的線粒體DNA突變進行檢測。該方法在PCR擴增后將微液滴打破進行測序分析。數字PCR使目標模板在微液滴中進行均一的擴增,提高了對稀有分子的捕獲效率。

數字PCR在靶向測序建庫中的應用

微液滴數字PCR技術在遺傳病檢測、腫瘤液態活檢等領域中已經成為極具競爭優勢的檢測方法。數字PCR技術的下一個爆發點是應用于靶向測序領域,如測序文庫的精準定量、靶向捕獲擴增等,展示出令人興奮的結果。微液滴數字PCR與高通量測序技術的完美融合,將更好地推進精準醫療的進步。


參考文獻:

1. Hedges DJ, Guettouche T, Yang S, et al. Comparison of three targeted enrichments strategies on the SOLID sequencing platform.?PLoS ONE,?2011, 6, e18595.

2. Tewhey R, Warner J, Nakano M, et al. Microdroplet-based PCR amplification for large scale targeted sequencing.?Nature Biotechnology,?2009, 27, 1025-1031.

3. Taylor SD, Ericson NG, Burton JN, et al. Targeted enrichment and high-resolution digital profiling of mitochondrial DNA deletions in human brain.?Aging Cell,?2014, 13, 29-38.

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